Valutazione di un rGroEL genere-specifico 1-524 IgM-ELISA e kit commerciali ELISA durante il decorso della leptospirosi in Thailandia

Nel presente studio, abbiamo sviluppato un saggio rGroEL _1-524 IgM-ELISA specifico per genere da utilizzare nella diagnosi di screening della sospetta leptospirosi tra i pazienti con malattia febbrile indifferenziata acuta durante la febbre acuta. L’accuratezza diagnostica di rGroEL _1-524 IgM-ELISA, Panbio IgM-ELISA commerciale e Virion-Serion Classic IgG-ELISA è stata valutata utilizzando 133 sieri di leptospirosi thailandese e 210 controlli. Le sensibilità erano del 91,7%, 59,6% e 17,7% per l’infezione acuta e le specificità erano rispettivamente del 92,6%, 90,2% e 88,3% per il controllo non leptospirosi.

L’rGroEL _1-524 IgM-ELISA aveva un’elevata sensibilità, al 92,3% e 91,7%, tra i casi positivi alla coltura e MAT-negativi 1-3 giorni dopo l’insorgenza dei sintomi (DPO1-3) ., rispettivamente. È stata riscontrata una ridotta specificità sul tifo da scrub, probabilmente dalla reazione crociata dell’anticorpo all’ortholog GroEL. Il Panbio IgM-ELISA commerciale aveva sensibilità a DPO1-3 del 30,8% e del 41,7% per i casi positivi alla coltura e MAT-negativi, mentre Virion-Serion IgG-ELISA ha mostrato sensibilità rispettivamente del 5,9% e del 13,3%. L’rGroEL _1-524 IgM-ELISA potrebbe essere utile come test di screening per la diagnosi precoce. Le prestazioni dell’ELISA commerciale suggeriscono l’applicabilità dell’IgM-ELISA per la diagnosi, mentre l’IgG-ELISA è utile per le indagini di sieroprevalenza. Tuttavia, si consiglia la conferma mediante test di riferimento.

 

Efficacia sierodiagnostica di vari kit ELISA per la diagnosi di rinotracheite bovina infettiva (IBR) in bovini e bufali in India

 

L’alphaherpesvirus-1 bovino (BoHV-1), l’agente eziologico della rinotracheite infettiva bovina (IBR), è un patogeno virale economicamente importante che colpisce bovini e bufali. I test sierologici sono usati principalmente per il rilevamento degli anticorpi, ma sono state rilevate variazioni nelle prestazioni diagnostiche del singolo test. Nel presente studio, sono stati valutati quattro kit ELISA disponibili in commercio {due ELISA indiretti (kit A e B) e due ELISA bloccanti (kit C e D)} per la rilevazione di anticorpi contro BoHV-1 in bovini e bufali indiani (idoneità di scopo).

La sensibilità diagnostica (dsn) e la specificità (dsp) di questi kit sono state determinate in tre modi; considerando il test di neutralizzazione del virus (VNT) come test gold standard, utilizzando le informazioni pre-test dei campioni e la maggior parte dei test. Lo screening di 200 sieri noti negativi (124 bovini, 76 bufali) provenienti da allevamenti privi di IBR ha rivelato che i kit ELISA basati su gB sono più specifici dei kit ELISA indiretti. Il test di 125 sieri positivi noti (81 bovini, 44 bufali) suggerisce che il kit B sia il più sensibile seguito dal kit C, A e D. È interessante notare che il kit D è risultato essere il più sensibile per il rilevamento di anticorpi BoHV-1 indotti dalla vaccinazione, seguito da kit B.

Tendenze simili sono state osservate anche nell’esperimento sul limite di diluizione eseguito utilizzando sieri noti infetti e vaccinati. Il VNT è risultato essere il test più specifico e il suo utilizzo come test gold standard ha rivelato che tutti i kit hanno una sensibilità superiore al 99%. Tutti i kit ELISA sono in grado di rilevare gli anticorpi specifici per BoHV-1 nei vitelli vaccinati con IBR già 11 giorni dopo la vaccinazione. Nelle statistiche Kappa è stato registrato un accordo quasi perfetto tra i kit ELISA. Le prestazioni complessive dei kit nella sierodiagnosi dell’IBR, come determinato dall’area sotto la curva nell’analisi ROC, sono state buone.

 

Sviluppo del kit ELISA Human Toxo IgG e falsa positività del test di agglutinazione al lattice per la diagnosi di toxoplasmosi

Il Toxoplasma gondii è un parassita zoonotico intracellulare che causa l’infezione in un’ampia gamma di animali a sangue caldo e nell’uomo. Lo scopo principale di questo studio era valutare il valore diagnostico dell’antigene SAG1 ricombinante (rSAG1) per T. gondii – Screening delle IgG attraverso lo Human Toxo IgG ELISA Kit (K). L’rSAG1 è stato espresso in E.i> E. coli (DE3), ed è stato purificato mediante cromatografia ad affinità con metallo. L’rSAG1 è stato confermato mediante immunoblotting e aveva una banda su 35 kDa.

Un totale di 400 sieri umani è stato testato da LAT e K. Centoventidue (30,5%) sieri sono stati trovati positivi da LAT e ottantanove (22,25%) sieri sono stati trovati positivi da K. Su 400 campioni, 80 erano selezionato per valutare le prestazioni di K attraverso il Toxoplasma gondii IgG ELISA Kit (C) commerciale. Su 80 sieri umani, 55 (68,75%) sono risultati positivi, 25 (31,25%) sono risultati negativi rispettivamente per K e C. Il valore di cut-off per K era 0,398 ed è stato calcolato attraverso la curva caratteristica dell’operatore del ricevitore.

Le piastre ELISA sono state rivestite ad una concentrazione ottimizzata di rSAG1 = 0,125/g/ml, e il test è stato eseguito diluendo i sieri a 1:50. La sensibilità e la specificità di K sono state osservate rispettivamente del 98,5% e del 100%. I sei sieri (K ^– L ⁺ ) sono stati trovati positivi tramite LAT e questi sieri umani sono stati successivamente valutati mediante analisi Western blot. Questi sieri non hanno prodotto una banda equivalente a 35 kDa all’analisi WB, quindi il LAT ha prodotto risultati falsi positivi.

Misurazione del progesterone nelle pecore utilizzando un kit ELISA commerciale per plasma umano

 

La determinazione delle concentrazioni di progesterone (P4) sierico o plasmatico è importante per riconoscere le pecore gravide e non gravide e anche per prevedere il numero di agnelli trasportati. Le 2 metodologie più comuni per la rilevazione del plasma P4 sono il dosaggio radioimmunologico (RIA) e il dosaggio immunoenzimatico (EIA). La RIA è molto costosa e non tutti i laboratori sono attrezzati per eseguire questo test; L’EIA è disponibile in commercio per uso umano, ma solo poche aziende producono kit specifici per specie, che sono costosi. Abbiamo verificato per il plasma ovino un kit ELISA (DiaMetra) meno costoso e facilmente disponibile progettato per quantificare P4 nell’uomo.

Sono stati utilizzati pool di plasma ovino e umano per confrontare ripetibilità, accuratezza, sensibilità e stabilità del P4 misurato dal kit DiaMetra. I dati di ripetibilità erano entro il 15% e i valori di accuratezza erano ~ 90% per entrambe le matrici di plasma. I dati di stabilità hanno mostrato una perdita di & lt; 20% per congelamento-scongelamento e & lt; 30% per 30 giorni di conservazione. Tutti i parametri erano accettabili secondo le linee guida internazionali per la convalida del metodo. Il kit ELISA umano è stato utilizzato con successo per quantificare la P4 plasmatica in 26 pecore durante la gravidanza fino al parto. Le concentrazioni di P4 sono state anche correlate con il numero di agnelli trasportati.

 

 

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