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Il recettore MARCO, scavenger di topi, riconosce le nanoparticelle di polistirene

Posted on Giugno 18, 2022 by Andrea

Targeting endoteliale di nanocarrier polimerici multivalenti ad alta affinità che prendono di mira la molecola di adesione intercellulare <em> 1 </em>. Mirando a misure diagnostiche e terapeutiche sulle cellule endoteliali (EC), è possibile migliorare il trattamento di molte malattie. Ad esempio, la molecola di adesione intercellulare <em> 1 </em> (ICAM- <em> 1 </em>), la molecola di adesione costitutiva delle cellule endoteliali, la cui attività aumenta in molte malattie, è un buon marker del targeting di enzimi terapeutici all’endotelio e nanocarrier polimerici (PNC) coniugati con anti-ICAM (anti-ICAM/PNC). La molecola costitutiva di adesione delle cellule endoteliali, aumentata in molte malattie, è un buon marker di targeting endoteliale di enzimi terapeutici e nanocarrier polimerici coniugati anti-ICAM (PNC) (anti-ICAM / PNC).

  1. Tuttavia, i fattori interni ed esterni che controllano il targeting degli anticorpi anti-ICAM/PNC verso la CE (ad es. affinità anti-ICAM e valenza e flusso PNC) non sono definiti. In questo studio, abbiamo testato i parametri di targeting EC in vitro e in vivo di anti-ICAM / PNC costituiti dal prototipo <em> polistirene </em> o polimeri biodegradabili di poli (acido lattico-coglicolico) (sfere di circa 200 nm contenenti circa 200 molecole anti-ICAM). Anti-
  2. ICAM / PNC, ma non controllano le IgG / PNC <em> 1 </em>) rapidamente (t <em> 1 </em> / 2 circa 5 min) e si legano in modo specifico alle EC attivate dal fattore di necrosi tumorale a dosi modo dipendente (Bmax di circa 350 PNC / cellula) in condizioni di stress da taglio sia statico che fisiologico e 2) legato a EC e accumulato nei vasi polmonari dopo iniezione endovenosa nei topi.
  3. Anti-ICAM / PNC ha mostrato un’affinità EC significativamente più alta rispetto all’anti-ICAM nudo (Kd di circa 80 pM vs circa 8 nM) in coltura cellulare e, forse a causa di questo fattore,  un valore più alto (<em> 1 </em > 85,3 +/- 24,2 contro 50,5 +/- <em> 1 </em>, 5% dose iniettata/g) e selettività (rapporto polmone/sangue 8 <em> 1 </em> 0,0 +/- <em > 1 </em> 0,9 rispetto a 2, <em> 1 </em> +/- 0,02, in <em> parte </em> a causa della più rapida rimozione del sangue) ai polmoni.
  4. Questi <em> 1 </em>) risultati mostrano che la riformattazione di anticorpi monomolecolari anti-ICAM in PNC multivalenti ad alta affinità migliora il loro targeting immunitario vascolare che è resistente all’idrodinamica fisiologica e 2) supporta la potenziale utilità di anti-ICAM/PNC in medicina applicazioni.

Modello cellulare tridimensionale del sistema respiratorio umano per lo studio delle interazioni con le molecole.

  • È stato progettato un nuovo modello di tripla co-coltura della barriera delle vie aeree umane per simulare la <em> parte cellulare </em> della barriera emato-aria delle vie aeree rappresentata da macrofagi, cellule epiteliali e cellule dendritiche.
  • Quando le cellule epiteliali (cellule A549) sono state coltivate su filtri con pori da 3,0 µm in una disposizione a due camere,  hanno formato monostrati con polarizzazione per i domini apicale e basolaterale. Le colture di cellule epiteliali sono state quindi integrate con macrofagi derivati ​​da monociti umani e cellule dendritiche rispettivamente negli aspetti apicale e basale.
  • Le colture unicellulari e le tre co-colture sono state caratterizzate per una serie di caratteristiche comuni, ad esempio la morfologia del tipo cellulare, l’integrità dello strato epiteliale e l’espressione di specifici marcatori di superficie cellulare (CD 1). </em> 4 per i macrofagi e CD86 per le cellule dendritiche).
  • L’interazione delle cellule epiteliali con macrofagi e cellule dendritiche durante l’assorbimento di <em> polistirene </em> <em> parti </em> e (diametro <em> 1 </em> mm) è stata esaminata mediante scansione laser confocale e elettrone per microscopia a trasmissione convenzionale.
  • Le particelle sono state trovate in tutti e tre i tipi cellulari, sebbene le cellule dendritiche non siano state direttamente esposte a <em> parti </em> iki. Sono necessarie ulteriori ricerche per comprendere il percorso di traslocazione.

Produzione di interleuchina-12 da parte di monociti umani infettati da Mycobacterium tuberculosis: il ruolo della fagocitosi.

  • Il Mycobacterium tuberculosis ei suoi antigeni sono potenti induttori dell’espressione di citochine da parte dei fagociti mononucleati. Questo studio ha esaminato la capacità di M.  tuberculosis vivo di stimolare l’espressione di interleuchina-<em> 1 </em> 2 (IL-<em> 1 </em> 2) da parte di monociti umani.
  • I monociti sono stati purificati dalle cellule mononucleate del sangue periferico mediante adesione e infettati con M. tuberculosis o esposti ad antigeni proteici solubili di M. tuberculosis (derivato proteico [PPD]). Live M. tuberculosis (<em> 1 </em> 0 (6) to <em> 1 </em> 0 (7) CFU/ml) è stato un forte stimolo per l’interleuchina <em> 1 </em> 2 ( IL – <em> 1 </em> 2).
  • Utilizzando la PCR di trascrizione inversa, l’mRNA di p40 è stato rilevato dopo 3 ore, con un picco compreso tra 6 e <em> 1 </em> 2 ore. e ridotto al valore basale dopo <em> 1 </em> da 8 a 24 ore dopo l’infezione. L’IL- <em> 1 </em> 2 bioattiva (p70) è stata misurata nel test di proliferazione del blasto di fitoemoagglutinina e sono stati confermati i risultati dell’mRNA di p40.
  • Al contrario, PPD solubile a concentrazioni note per indurre prontamente IL-1 <em> 1 </em> e l’espressione alfa del fattore di necrosi tumorale da parte dei monociti (da <em> 1 </em> 0 a <em> 1 </em > 00 microg/ml) era uno stimolo debole per l’espressione dell’mRNA di IL-<em> 1 </em> 2 p40. La diversa efficacia di M. tuberculosis e PPD per l’espressione di IL-<em> 1 </em> 2 monocitica era <em> in parte </em> dovuta alla necessità di fagocitosi. L’ <em> 1 </em> 2 induzione di IL-1 in risposta a M. tuberculosis è stata ridotta dalla citocalasina D.
  • Inoltre,  la fagocitosi di M. tuberculosis morto o perline neutre di <em> polistirene </em> da 2 micron da parte di monociti ha indotto IL-<em> 1 </em> 2 p40 mRNA. Al contrario, le sfere da 0,5 micron, che possono entrare nelle cellule per pinocitosi, non hanno stimolato l’espressione di IL-<em> 1 </em> 2. Funzionalmente, IL- <em> 1 </em> 2 ha prontamente migliorato la produzione di IFN-gamma stimolata dalla PPD e la citotossicità mediata dai linfociti T CD4 + da parte delle cellule mononucleate del sangue periferico da donatori sani di tubercolina, ma ha indotto un minore potenziamento in M. tuberculosis vivo era un antigene.
  • Questi risultati suggeriscono che i livelli di <em> 1 </em> 2 IL-1 sono elevati come <em> parte </em> della risposta precoce delle citochine mononucleate a M. tuberculosis e che gli eventi cellulari correlati alla fagocitosi sono essi stessi potenti . segnale per produrre IL- <em> 1 </em> 2. A sua volta, IL-1 <em> 1 </em> 2 rilasciato dai macrofagi infetti può migliorare ulteriormente la funzione effettrice specifica di M. tuberculosis dei linfociti T CD4 +.

Modello di parete delle vie aeree ottimizzato in vitro per lo studio delle interazioni particella-cellula.

  1. In quanto <em> parte </em> della barriera del tessuto respiratorio, le cellule epiteliali polmonari svolgono un ruolo importante nel prevenire la penetrazione nel corpo da parte di <em> parti </em> inalate di corpi estranei. Nella maggior parte dei modelli di coltura cellulare progettati per studiare <em> parte </em> dell’interazione icle-cellula, le cellule sono immerse nel mezzo.
  2. Ciò non riflette lo stato fisiologico delle cellule epiteliali polmonari che sono esposte all’aria, separate da essa solo da uno strato molto sottile di rivestimento liquido con una pellicola di tensioattivo all’interfaccia aria-liquido. In questo studio, le cellule epiteliali A549 sono state coltivate su membrane microporose in un sistema a due camere. Dopo la formazione del monostrato confluente, le cellule sono state esposte all’aria.
  3. La morfologia cellulare e l’espressione delle proteine ​​a giunzione stretta sono state esaminate mediante scansione laser confocale e microscopia elettronica a trasmissione. Le cellule esposte all’aria hanno mantenuto una struttura monostrato per 2 giorni, hanno espresso giunzioni strette e hanno sviluppato resistenza elettrica transepiteliale.
  4. Il tensioattivo è stato prodotto e rilasciato sul lato apicale delle cellule epiteliali esposte all’aria. Per studiare l’interazione <em> parte </em> cellula-icle, un icle fluorescente <em> 1 </em> microm <em> polistirene </em> <em> parte </em> è stato spruzzato sulla superficie epiteliale . Dopo 4 ore, l’8,8% delle <em> parti </em> compresse è stato trovato all’interno dell’epitelio.
  5. Questa frazione è aumentata al 38% dopo 24 ore. Durante tutte le osservazioni, <em> parti </em> iki erano sempre nelle celle, ma mai tra di loro. In questo studio, presentiamo un modello di parete delle vie aeree in vitro costituito da cellule epiteliali polmonari esposte all’aria rivestite con un rivestimento liquido con una membrana tensioattiva per studiare <em> parte </em> interazioni con cellule ciclocellulari.

Recenti studi tossicologici indicano che nano <em> parti </em> iki o ultrafini <em> parti </em> iki (<em> 1 </em> 00 nm) sono più tossiche di <em> fine </em> parti </em>. zecche (<2 micron) a causa della loro maggiore superficie.

  • È noto che i macrofagi alveolari svolgono un ruolo importante nella prima difesa contro varie parti <em> ambientali </em> e microrganismi.
  • Lo fa legandosi al recettore dei macrofagi strutturato in collagene (MARCO), uno dei numerosi recettori di tipo scavenger espressi sulla superficie delle cellule dei macrofagi.
  • MARCO ha dimostrato di mediare l’ingestione di <em> parti </em> ambientali non ionizzate come TiO (2) e Fe (2) O (3) (<em> 1 </em> 0,3 micrometri di diametro) .
  • Tuttavia, si sa poco sull’intrappolamento di nano <em> parti </em> di cellule. In questo studio abbiamo verificato se MARCO media la cattura di nano <em> parti </em> cili utilizzando <em> polistirene </em> <em> parti </em> etichettate con fluorescenza (20 nm, 200 nm e <em > 1 </em> micrometri).
  • Le cellule COS-7 sono state trasfettate con il cDNA MARCO o il vettore vuoto e l’associazione di <em> parti </em> ikli con le cellule è stata osservata mediante microscopia a fluorescenza e microscopia a forza atomica.
  • Le cellule trasfettate con MARCO si sono legate a tutte e tre le dimensioni di <em> parti </em> ghiaccioli in modo dipendente dal tempo, mentre dopo 5 ore non c’era alcun legame evidente di <em> parti </em> ghiaccioli alla cellula vuota trasfettata vettore.
  • L’assorbimento di <em> parti </em> ghiaccio da parte delle cellule trasfettate con MARCO è stato <em> parzialmente </em> inibito da polyG.

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  • Questi risultati suggeriscono che i macrofagi si legano a nano <em> parte </em> ikulars (20 nm) almeno <em> parte </em> di MARCO e che MARCO svolge un ruolo nella rimozione di nano <em> parte </em> </ em > punti calvi, che possono depositarsi attorno al processo alveolare.

 

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