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Studi meccanici di singoli complessi ribosoma/mRNA

Posted on Giugno 18, 2022Giugno 18, 2022 by Andrea

Agente di contrasto ultrasonico mirato per l’imaging molecolare dell’infiammazione in un flusso di taglio elevato.I materiali di contrasto ultrasonici mirati (microbolle piene di gas che trasportano ligandi di selectine o integrine endoteliali) sono stati studiati come potenziali agenti di imaging molecolare. Tali microbolle mostrano generalmente un buon potere di puntamento in condizioni di flusso più lento.

  1. Tuttavia,  in condizioni di flusso elevato, il legame può essere limitato. Qui descriviamo una microbolla in grado di legarsi in modo efficiente a bersagli sia nel flusso lento che veloce (superamento dello stress di taglio della parete di 4 dyne / cm2) utilizzando una forma polimerica raggruppata del ligando di selezione rapida Lewis (X) sialyl.
  2. Le microbolle sono state preparate da decafluorobutano e stabilizzate con un monostrato di fosfatidilcolina, PEG stearato e biotina-PEG-lipide. PSLe biotinilato (x) (sialyl-Lewis (X) poliacrilammide) o anticorpo biotinilato anti-P-selectina (RB40.34) è stato attaccato alle microbolle tramite un  ponte di streptavidina.
  3. Nel modello di adesione diretta con piastre parallele nella cella a flusso, le vescicole PSLe (x) hanno mostrato adesione specifica, ritenzione e lento rotolamento sulle  piastre rivestite con P-selectina.
  4. Le prestazioni dell’adesione mirata permanente alla superficie della P-selectina (140 particelle/micron (2)) erano paragonabili per il trasporto di anticorpi e le bolle mirate PSLe (x)  sotto uno sforzo di taglio di 0,68 dyne/cm (2). Al flusso veloce (4,45 diin / cm (2)), le vescicole di targeting PSLe (x) hanno mantenuto la loro capacità di legame, mentre il targeting mediato da anticorpi è diminuito di oltre 20 volte. Alla densità superficiale della P-selectina inferiore  (7 particelle/micron (2)), il targeting di PSLe (x) era più efficace di quello dell’anticorpo in tutte le condizioni di flusso testate.
  5. Le piastre di controllo negativo  rivestite di caseina  non hanno intrappolato le bolle nell’intervallo delle condizioni di flusso testate. Per confermare l’ecogenicità, le vescicole PSLe (x) mirate sono state visualizzate su  lastre di polistirene  rivestite  con P-selectina  mediante imaging ad ultrasuoni con uno scanner clinico operante in modalità di inversione del polso; le piastre di controllo prive di bolle mirate non hanno mostrato una retrodiffusione acustica significativa.
  6. In vivo, in un modello murino di infiammazione della vena femorale, l’efficienza di targeting delle microbolle PSLe (x) (x) somministrate per via endovenosa era paragonabile a quella di un targeting mediato da anticorpi anti-P-selectina e di gran lunga superiore all’accumulo di non- vescicole di controllo mirate. Nell’infiammazione dell’arteria femorale, il targeting delle microbolle mediato da PSLe (x) era migliore del targeting mediato da anticorpi.

Saggio della transglutaminasi in piastra per microtitolazione utilizzando 5- (biotinamide) pentilammina come substrato.

  • Le transglutaminasi appartengono a un’importante famiglia di enzimi coinvolti nell’emostasi, nella formazione della pelle e nella guarigione delle ferite. Descriviamo una tecnica per misurare l’attività della transglutaminasi utilizzando     piastre di microtitolazione   in polistirene rivestite con   N, N’-dimetilcaseina.
  • Il substrato di pentilammina 5- (biotinamide) è incorporato in modo covalente nella N, N’-dimetilcaseina dalla transglutaminasi in una reazione calcio-dipendente.
  • Il prodotto biotinilato viene rilevato con   streptavidina  -fosfatasi alcalina e quantificato misurando l’assorbanza a 405 nm dopo l’aggiunta di p-nitrofenilfosfato.
  • Il test è sensibile, specifico e lineare con concentrazioni plasmatiche di fattore XIIIa comprese tra 0,08 e 1,25 microgrammi/ml e con concentrazioni di transglutaminasi epatica di cavia purificata comprese tra 0,05 e 0,8 microgrammi/ml.
  • Il coefficiente di variazione intra-saggio è inferiore all’8%. Il test in fase solida è stato utilizzato per quantificare l’attività della transglutaminasi negli estratti di Escherichia coli che esprimono le catene ricombinanti del fattore XIII A e per analizzare gli inibitori del fattore XIIIa.
  • Questo metodo faciliterà l’analisi struttura-funzione delle transglutaminasi utilizzando metodi del DNA ricombinante. Inoltre, lo screening degli inibitori naturali e sintetici del fattore XIIIa sarà accelerato con questo saggio su piastra per microtitolazione in fase solida.

Identificazione della proteina 60 da shock termico come ligando su Histoplasma capsulatum che media il legame ai recettori CD18 sui macrofagi umani.

  • Histoplasma capsulatum (Hc) è un fungo intracellulare facoltativo che si lega ai recettori CD11 / CD18 sui macrofagi (Mphi). Per identificare il ligando (i) sul lievito Hc riconosciuto da Mphi, il recettore del complemento umano purificato di tipo 3 (CR3, CD11b / CD18) è stato utilizzato per sondare una macchia Far Western di estratti detergenti della parete cellulare e della membrana cellulare Hc.
  • CR3 ha riconosciuto una singola proteina da 60 kDa che è stata identificata come una proteina da shock termico 60 (hsp60). La biotinilazione vitale del lievito seguita da precipitazione  con perline rivestite  di streptavidina  e Western blotting anti-hsp60 ha mostrato che hsp60 era sulla superficie del lievito Hc.
  • La microscopia elettronica e confocale ha rivelato che hsp60 si trova sulla parete cellulare del lievito in gruppi separati. Il ricombinante hsp60 (rhsp60) ha inibito l’attaccamento del lievito Hc a Mphi.
  • Hsp60 ricombinante e Abs a CD11b e CD18 hanno inibito il legame del lievito alle cellule ovariche di criceto cinese trasfettate CR3 (CHO3). Perle di polistirene  rivestite con Rhsp60     legate a Mphi e l’attaccamento è stato inibito da Abs a CD11 e CD18.
  • Freeze / Thaw Extract (F / TE), una preparazione di proteine ​​di superficie Hc di lievito che conteneva hsp60, inibiva l’attaccamento del lievito Hc a Mphi. L’esaurimento di hsp60 con F / TE ha rimosso la capacità di F / TE di bloccare il legame di Hc con Mphi.
  • È interessante notare che rhsp60 non ha inibito il legame di lievito Hc alle cellule dendritiche (DC) che riconoscono Hc da Ag5 molto tardi. Inoltre, F / TE ha inibito l’attaccamento di Hc a DC anche dopo che hsp60 era esaurito. Pertanto, Hc hsp60 sembra essere il ligando principale che media l’attaccamento di Hc a Mphi CD11 / CD18, mentre DC riconosce Hc da altri ligandi.

Individuazione rapida del virus dell’herpes simplex in campioni clinici mediante il test di  cattura dell’enzima di cattura della biotina-streptavidina.

  1.   Per rilevare l’antigene del virus dell’herpes simplex (HSV) è stato sviluppato un  saggio   enzimatico sensibile alla biotina e all’assorbimento della streptavidina (B / SA Capture ELISA). L’anti-HSV di coniglio (frazione di immunoglobulina G)   è stato rivestito su piastre di microtitolazione in polistirene   a 96 pozzetti irradiate a fondo     piatto e utilizzato per catturare l’antigene HSV.
  2. Sono stati aggiunti campioni clinici da pazienti con herpes genitale. Come secondo anticorpo è stata utilizzata l’immunoglobulina G di coniglio anti-HSV G legata alla biotina. Il complesso antigene-anticorpo è stato rilevato   con streptavidina  coniugata con fosfatasi alcalina , che si era legata alla biotina.
  3. Per i campioni clinici, il test aveva una sensibilità del 95,6% e una specificità del 91,4% rispetto al metodo di coltura tissutale. La presenza dell’antigene HSV in campioni non infettivi è stata confermata bloccando la reazione con anticorpi anti-HSV umani e di coniglio non marcati.
  4. Il livello di antigene rilevato dal B/SA Capture ELISA non era necessariamente correlato al titolo di infettività dei campioni.
  5. Gli antigeni dell’HSV potrebbero essere rilevati dall’ELISA di cattura B/SA quando l’infettività del virus è stata distrutta a 37 gradi C, dall’irradiazione UV o dal trattamento con Triton X-100, ma non dal trattamento con ipoclorito

È stata sviluppata una metodologia per ancorare i ribosomi di Escherichia coli 70S a una superficie di vetro reattiva alla cisteina modificata chimicamente.

I ribosomi immobilizzati mantengono la capacità di legare lo stampo dell’acido poliuridilico (poli (U)),  consentendo lo studio delle proprietà meccaniche dei singoli complessi ribosoma-poli (U) con l’uso di pinzette laser. Streptavidina  –  Microsfere di polistirene rivestite     legate specificamente all’estremità biotinilata di fili di poli (U) lunghi 3 ‘(fino a 10.000 basi).

È stato creato un nuovo metodo ottico per controllare la posizione della trappola laser lungo l’asse ottico del microscopio con una risoluzione di 2 nm, facilitando la misurazione della relazione forza-allungamento per poli (U). Alcuni complessi ribosoma-poli (U) immobilizzati supportavano una forza di 100 pN applicata all’estremità 3′ dell’mRNA.

Streptavidin Polystyrene

SVP-1000-4 Spherotech 4 mL 472 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVBP-02-10 Spherotech 10 mL 263 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVBP-02-100 Spherotech 100 mL 1542 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVBP-03-10 Spherotech 10 mL 263 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVBP-03-100 Spherotech 100 mL 1542 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-03-10 Spherotech 10 mL 273 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-05-10 Spherotech 10 mL 273 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-08-10 Spherotech 10 mL 273 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-10-100 Spherotech 100 mL 3318 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-10-5 Spherotech 5 mL 283 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-100-4 Spherotech 4 mL 395 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-15-5 Spherotech 5 mL 289 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-15-50 Spherotech 50 mL 1720 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-150-4 Spherotech 4 mL 411 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-20-5 Spherotech 5 mL 289 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-200-4 Spherotech 4 mL 431 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-30-5 Spherotech 5 mL 289 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-30-50 Spherotech 50 mL 1720 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-40-5 Spherotech 5 mL 289 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-400-4 Spherotech 4 mL 492 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-50-5 Spherotech 5 mL 289 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-60-5 Spherotech 5 mL 289 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-60-50 Spherotech 50 mL 1720 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-800-05 Spherotech 5 mL 137 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP-800-4 Spherotech 4 mL 472 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP01-008-5 Spherotech 5 mL 426 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP1-200-4 Spherotech 4 mL 659 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP1-30-5 Spherotech 5 mL 482 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVP1-50-5 Spherotech 5 mL 482 EUR

Streptavidin Polystyrene Particles

SVPX-08-10 Spherotech 10 mL 273 EUR

BSA Coated Polystyrene Particles

BP-08-10 Spherotech 10 mL 243 EUR

BSA Coated Polystyrene Particles

BP-30-5 Spherotech 5 mL 269 EUR

BSA Coated Polystyrene Particles

BP-60-5 Spherotech 5 mL 289 EUR

BSA Coated Polystyrene Particles

BP2-150-5 Spherotech 5 mL 507 EUR

Anti-DNP Coated Polystyrene Particles

DNPP-50-2 Spherotech 2 mL 289 EUR

Anti-Digoxigenin Coated Polystyrene Particles

DIGP-05-2 Spherotech 2 mL 279 EUR

Anti-Digoxigenin Coated Polystyrene Particles

DIGP-20-2 Spherotech 2 mL 289 EUR

Anti-Digoxigenin Coated Polystyrene Particles

DIGP-40-2 Spherotech 2 mL 289 EUR

Ms IgG Coated Polystyrene Particles

MsGPX-50-5 Spherotech 5 mL 314 EUR

Streptavidin coated 96-well Plate

6523-5 Biovision 327 EUR

Oligo (dT)25 Coated Polystyrene Beads

OdT25P-100-4 Spherotech 4 mL 411 EUR

Streptavidin-Coated Strip Microwell Plate (Flat)

R-1102 EpiGentek 5/pk 300.85 EUR

Ms Anti-FLAG M2 Coated Polystyrene Particles

MPAF-05-2 Spherotech 2 mL 310 EUR

Ms Anti-FLAG M2 Coated Polystyrene Particles

MPAF-20-2 Spherotech 2 mL 294 EUR

DiagPoly Streptavidin Polystyrene Nanoparticles, 100 nm

DNG-P076 Creative Diagnostics 1 mL 793 EUR

DiagPoly Streptavidin Polystyrene Nanoparticles, 200 nm

DNG-P077 Creative Diagnostics 1 mL 793 EUR

DiagPoly Streptavidin Polystyrene Particles, 25 µm

DNG-P078 Creative Diagnostics 1 mL 793 EUR

DiagPoly Streptavidin Polystyrene Particles, 30 µm

DNG-P079 Creative Diagnostics 1 mL 803 EUR

DiagPoly Streptavidin Polystyrene Particles, 40 µm

DNG-P080 Creative Diagnostics 1 mL 803 EUR

DiagPoly Streptavidin Polystyrene Particles, 50 µm

DNG-P081 Creative Diagnostics 1 mL 803 EUR

DiagPoly Streptavidin Polystyrene Particles, 100 µm

DNG-P082 Creative Diagnostics 1 mL 803 EUR

DiagPoly Streptavidin Polystyrene Particles, 12 µm

DNG-P225 Creative Diagnostics 1 mL 767 EUR

DiagPoly Avidin Coated Polystyrene Particles, 0.7-0.9 µm

DNM-C001 Creative Diagnostics 10 mL 1010 EUR

DiagPoly Avidin Coated Polystyrene Particles, 1.0-1.4 µm

DNM-C002 Creative Diagnostics 10 mL 1010 EUR

DiagPoly Avidin Coated Polystyrene Particles, 3.0-3.9 µm

DNM-C003 Creative Diagnostics 5 mL 885 EUR

DiagPoly Avidin Coated Polystyrene Particles, 6.0-8.0 µm

DNM-C004 Creative Diagnostics 5 mL 885 EUR

DiagPoly Biotin Coated Polystyrene Particles, 0.7-0.9 µm

DNM-C016 Creative Diagnostics 10 mL 885 EUR

DiagPoly Biotin Coated Polystyrene Particles, 3.0-3.9 µm

DNM-C017 Creative Diagnostics 5 mL 885 EUR

DiagPoly Biotin Coated Polystyrene Particles, 6.0-8.6 µm

DNM-C018 Creative Diagnostics 5 mL 1000 EUR

Goat anti-Rat IgG (Fc) Coated Polystyrene Particles

RTPFC-60-5 Spherotech 5 mL 289 EUR

Goat anti-Rat IgG (H&L) Coated Polystyrene Particles

RTPXA-60-5 Spherotech 5 mL 283 EUR

Absolute Mag Streptavidin Magnetic Polystyrene Particles, 12 µm

WHM-G159 Creative Diagnostics 1 mL 554 EUR

Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran Coated, 130 nm

WHM-G019 Creative Diagnostics 1 mL 554 EUR

Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran Coated, 250 nm

WHM-G034 Creative Diagnostics 1 mL 551 EUR

Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran Coated, 500 nm

WHM-G047 Creative Diagnostics 1 mL 572 EUR

Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran Coated, 50 nm

WHM-G087 Creative Diagnostics 1 mL 746 EUR

Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran Coated, 80 nm

WHM-G107 Creative Diagnostics 1 mL 746 EUR

Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran Coated, 100 nm

WHM-G121 Creative Diagnostics 1 mL 642 EUR

Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran-coated, 70 nm

WHM-G246 Creative Diagnostics 1 mL 793 EUR

DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Yellow, 0.4-0.6 µm

DNM-L088 Creative Diagnostics 5 mL 663 EUR

DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Yellow, 0.7-0.9 µm

DNM-L089 Creative Diagnostics 5 mL 663 EUR

DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Yellow, 1.7-2.2 µm

DNM-L090 Creative Diagnostics 5 mL 767 EUR

DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Pink, 0.4-0.6 µm

DNM-L091 Creative Diagnostics 5 mL 663 EUR

DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Pink, 1.7-2.2 µm

DNM-L092 Creative Diagnostics 5 mL 767 EUR

DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Purple, 0.4-0.6 µm

DNM-L093 Creative Diagnostics 5 mL 663 EUR

DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Purple, 0.7-0.9 µm

DNM-L094 Creative Diagnostics 5 mL 663 EUR

DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, FITC, 1.7-2.2 µm

DNM-L097 Creative Diagnostics 5 mL 767 EUR

DiagPoly Biotin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Yellow, 0.4-0.6 µm

DNM-L098 Creative Diagnostics 5 mL 663 EUR

DiagPoly Biotin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Yellow, 7.0-7.9 µm

DNM-L099 Creative Diagnostics 5 mL 829 EUR

DiagPoly Biotin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Pink, 0.4-0.6 µm

DNM-L100 Creative Diagnostics 5 mL 663 EUR

DiagPoly Biotin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Pink, 1.7-2.2 µm

DNM-L101 Creative Diagnostics 5 mL 767 EUR

DiagPoly Biotin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Pink, 5.0-5.9 µm

DNM-L102 Creative Diagnostics 5 mL 767 EUR

DiagPoly Biotin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Blue, 3.0-3.9 µm

DNM-L105 Creative Diagnostics 5 mL 767 EUR

DiagPoly Biotin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Blue, 7.0-7.9 µm

DNM-L106 Creative Diagnostics 5 mL 829 EUR

DiagPoly Streptavidin Fluorescent Polystyrene Particles, Yellow Green, 1 µm

DNG-P218 Creative Diagnostics 1 mL 975 EUR

DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Sky Blue, 0.7-0.9 µm

DNM-L095 Creative Diagnostics 5 mL 663 EUR
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 Il legame del Phe-tRNA (Phe) N-acetilato, un analogo dell’iniziatore fMet-tRNA (Met), ha rafforzato la popolazione di complessi in grado di resistere a forze elevate. La durata dell’omopolimero di poli (U) RNA, modellato come una catena simile a un verme, è risultata essere 0,79 +/- 0,05 nm e l’elasticità della spina dorsale è risultata essere 900 +/- 140 pN, simile ai valori per DNA a filamento singolo.

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