Saggio immunoenzimatico sensibile per antigeni core del virus dell’epatite B e loro correlazione con la carica virale.

1. È stato sviluppato un test immunoenzimatico sensibile (EIA) specifico per   l’ antigene  core   dell’epatite B  ( HBcAg  ) e   l’ antigene  del virus dell’epatite B (HBeAg).  Abbiamo etichettato i prodotti del gene  pre  – core  /  core come antigeni core del virus  dell’epatite B (  HBV  )  ( HBcrAg   ). Al fine di rilevare l’HBcrAg anche nei campioni contenenti anticorpi anti-HBc/e, i campioni sono stati pretrattati con detergenti.
2. Gli anticorpi vengono inattivati ​​da questo pretrattamento e allo stesso tempo gli   antigeni   vengono rilasciati e gli epitopi vengono esposti. Il test ha mostrato un recupero dal 71 al 112% utilizzando sieri HBcrAg-positivi. Non abbiamo osservato alcuna interferenza da parte degli anticoagulanti o dei componenti del sangue testati. Quando il cut-off è stato inizialmente fissato a 10 (3) U/ml, tutti i sieri di controllo sani (HBsAg/  HBV  – DNA negativo; n = 108) e gli anticorpi anti-HCV positivi (n = 59) sono stati identificati come negativi. Il test ha mostrato un limite di rilevamento di 4 x 10 (2) U/ml utilizzando l’   antigene ricombinante    .
3. I limiti di rilevamento sono stati confrontati in quattro  sieri HBV   ad alto titolo diluiti in serie. Il test HBcrAg ha mostrato una sensibilità maggiore rispetto  all’amplificazione mediata dalla trascrizione (TMA) dell’HBV -DNA  o al test radioimmunologico (RIA) HBeAg nel test di diluizione. I livelli di HBcrAg erano ben correlati con   l’HBV  -DNA TMA (r = 0,91, n = 29) e il rilevamento interno della PCR in tempo reale (r = 0,93, n = 47) nei pazienti con epatite B.
4. Nei pannelli di sieroconversione HBeAg/anti-HBe, la concentrazione di HBcrAg variava in linea con  i livelli di HBV -DNA  . La concentrazione di HBcrAg riflette la   carica virale dell’HBV equivalente al livello di HBV-DNA  ,  quindi il test offre un metodo semplice per monitorare l’epatite B.
5. Studio clinico di fase I in adulti sani di un candidato per il vaccino intranasale contenente   antigeni di   superficie e   core   dell’epatite B ricombinante  .
6. Il candidato vaccino intranasale (NASVAC) contenente  gli antigeni di  superficie (HBsAg) e   core   (  HBcAg) del virus dell’epatite B (  HBV  ) ha dimostrato di essere altamente immunogenico nei modelli animali. 
7. Lo studio clinico di Fase I, randomizzato, in doppio cieco, controllato con placebo è stato condotto su 19 maschi adulti sani senza marcatori sierologici di immunità/   infezione da HBV  . Questo studio è stato progettato per studiare la sicurezza e il profilo immunogenico della co-somministrazione nasale di entrambi gli   antigeni  ricombinanti dell’HBV  . Lo studio è stato condotto secondo le linee guida della Buona pratica clinica.
8. I partecipanti avevano un’età compresa tra 18 e 45 anni e sono stati randomizzati a ricevere una miscela di 50 μg di HBsAg e 50 μg   di HBcAg   o soluzione salina allo 0,9% come placebo come spray nasale a cinque dosi a 0, 7, 15, 30 e 60 giorni. Un volume totale di 0,5 ml è stato somministrato in due dosi da 125 microli per narice. Gli eventi avversi sono stati registrati attivamente 1 ora, 6 ore, 12 ore, 24 ore, 48 ore, 72 ore, 7 giorni e 30 giorni dopo ciascuna dose. I titoli anti-HBs e anti-HBc sono stati valutati utilizzando gli appropriati kit ELISA nei giorni 30 e 90.
9. Il candidato al vaccino era sicuro e ben tollerato. Le reazioni avverse includevano starnuti (34,1%), naso che cola (12,2%), naso chiuso (9,8%), prurito al palato (9,8%), mal di testa (9,8%) e malessere generale, benessere (7,3%). Tutte queste reazioni erano autolimitanti e di lieve intensità. Durante lo studio non sono stati registrati eventi gravi o imprevisti. Il vaccino ha indotto una sieroconversione anti-HBc nel 100% dei soggetti già al giorno 30  del programma vaccinale, mentre il titolo sieroprotettivo anti-HBs >> o = 10 UI/L) ha raggiunto il picco al giorno 90 (75%). Tutti i soggetti nel gruppo placebo sono rimasti sieronegativi per tutto lo studio.
10. Il candidato al vaccino HBsAg  HBcAg   è risultato sicuro, ben tollerato e immunogeno in questo studio di Fase I su adulti sani. A nostra conoscenza, questa è la prima dimostrazione della sicurezza e dell’immunogenicità di un potenziale   vaccino  nasale contenente HBV   .

Il nucleo del virus dell’epatite B e gli antigeni e inducono diversi sottoinsiemi di cellule Th: la struttura dell’antigene può influenzare il fenotipo delle cellule Th.

1. La secrezione  dell’antigene e del  virus dell’epatite B (  HBV  ) (HBeAg) è stata preservata durante l’evoluzione degli epadnavirus. Tuttavia, la funzione di questa forma virale secreta dalla nucleoproteina rimane enigmatica. È stato suggerito che HBeAg agisca come un immunomodulatore.
2. Abbiamo quindi esplorato la possibilità che le due forme strutturali della nucleoproteina virale,   il nucleo  molecolare dell’HBV    (  HBcAg  ) e l’ HBeAg non particellare, possano indurre preferenzialmente diversi sottoinsiemi di linfociti T helper (Th).
3. Per questo, i topi sono stati immunizzati   con HBcAg e HBeAg ricombinanti     in presenza e assenza di adiuvanti e sono stati determinati i profili isotipici dell’immunoglobulina G (IgG) di anti-HBc e anti-HBe. In secondo luogo, è stata misurata la produzione di citochine in vitro da parte delle cellule Th stimolate da  HBcAg  e HBeAg.
4. L’immunogenicità   di HBcAg  , a differenza di HBeAg, non ha richiesto l’uso di adiuvanti. Inoltre,   HBcAg   ha indotto principalmente anticorpi anti-HBc IgG2a e IgG2b, con bassi livelli di IgG3 e nessun anti-HBc IgG1.
5. Al contrario, la risposta anticorpale anti-HBe era dominata dall’isotipo IgG1; basso livello di anticorpi IgG2a o IgG2b anti-HBe e nessun anticorpo IgG3 anti-HBe. La produzione di citochine da parte delle cellule Th stimolate da  HBcAg  e HBeAg era coerente con i profili isotipici delle IgG. Le cellule Th stimolate con HBcAg hanno  prodotto in modo efficiente interleuchina-2 (IL-2) e interferone gamma (IFN-gamma) e bassi livelli di IL-4. Al contrario, l’immunizzazione con HBeAg ha indotto una produzione efficiente di IL-4 e quantità inferiori di IFN-gamma.
6. I risultati indicano che   HBcAg   induce preferenzialmente, ma non esclusivamente, cellule simili a Th1  e che HBeAg in modo preferenziale, ma non esclusivo, induce cellule simili a Th0 o Th2. Poiché   HBcAg   e HBeAg reagiscono in modo incrociato con il riconoscimento delle cellule Th, questi risultati mostrano che le cellule Th con la stessa specificità possono evolvere in diversi sottoinsiemi Th in base alla forma strutturale dell’immunogeno.
7. Questi risultati possono essere importanti per l’infezione cronica da  HBV   . L’HBeAg circolante può indebolire i meccanismi di eliminazione dei farmaci antivirali inducendo la produzione antinfiammatoria di citochine Th2-simili. Infine, l’effetto della  struttura dell’antigene   sul fenotipo dei linfociti Th non era assoluto e poteva essere modulato dal trattamento in vivo con citochine. Ad esempio, il trattamento con IFN-alfa ha inibito la produzione di anticorpi Th2 specifici per HBeAg e ha modificato il profilo isotipico delle IgG anti-HBe verso il fenotipo Th1.

La stimolazione di una risposta citotossica dei linfociti T all’antigene esogeno del   nucleo  del   virus dell’epatite B dipende dai linfociti B.

L’ antigene  principale del  virus dell’epatite B (  HBV )   (  HBcAg )  ha la capacità unica di legare ad alta frequenza i linfociti B umani e murini naive. Il ruolo delle   cellule B ingenue che legano l’  HBcAg nell’immunogenicità dell’HBcAg   non è chiaro. Le proprietà di legame dell’HBcAg dei   linfociti B naive sono state caratterizzate utilizzando  particelle di HBcAg  con sequenze di regioni di spike mutate (residui 76-85).

L’eliminazione dei residui 76-85 (HBcDelta76-85) ha interrotto il legame ingenuo delle cellule B, mentre l’eliminazione dei residui 79-85 no. Le molecole di HBcAg   con Ile invece di Ala naturale in posizione 80 non si legavano ai linfociti B ingenui, mentre l’inversione di Ile80 – >> Ala ripristinava il legame dei linfociti B.

L’interruzione della capacità   di HBcAg  di legare i linfociti B ha avuto un effetto marginale sull’immunogenicità complessiva dei linfociti B in varie particelle, suggerendo che erano ugualmente efficaci nello stimolare i linfociti T helper. Pertanto, è allo studio il ruolo delle   cellule B che legano HBcAg  nella stimolazione delle cellule T citotossiche specifiche (CTL) HBcAg  .

HBcAg (HBV) (18 - 27)
5-01267	CHI Scientific	4 x 5mg	Ask for price
Recombinant HBV Core Protein
VAng-Lsx04579-1mg	Creative Biolabs	1 mg	2236 EUR
QuickTiter HBV Core Antigen ELISA Kit
VPK-150	Cell Biolabs	96 assays	914 EUR
QuickTiter HBV Core Antigen ELISA Kit
VPK-150-5	Cell Biolabs	5 x 96 assays	3756 EUR
Hepatitis B Core Antigen (HBcAg) Antibody (HRP)
abx411397-01mg	Abbexa	0.1 mg	509 EUR
Virus Hepatitis B Core Antigen (HBcAg) Protein
abx670097-01mg	Abbexa	0.1 mg	690 EUR
Virus Hepatitis B Core Antigen (HBcAg) Protein
abx670098-01mg	Abbexa	0.1 mg	565 EUR
Virus Hepatitis B Core Antigen (HBcAg) Protein
abx670100-01mg	Abbexa	0.1 mg	565 EUR
HBcAg (HBV) (18 27) Peptide
20-abx266153	Abbexa	439.00 EUR 565.00 EUR 328.00 EUR	10 mg 25 mg 5 mg
HBV Core Antibody
20-abx137186	Abbexa	885.00 EUR 342.00 EUR 1609.00 EUR	0.5 mg 100 ug 1 mg
HBV Core Antigen (aa 1 - 186) [His]
DAG1452	Creative Diagnostics	100 µg	645 EUR
Rat Hepatitis B Core Antigen (HbcAg) ELISA Kit
abx055691-96tests	Abbexa	96 tests	668 EUR
anti-HBcAg core IgG2a
036-A-01mg	Virogen	0,1 mg	267.5 EUR
anti-HBcAg core IgG2a
036-A-1000ug	Virogen	1000 ug	1282.5 EUR
Recombinant HBcAg antigen, HRP-conjugated
DAG4623	Creative Diagnostics	1mg	858 EUR
HBV core (107 - 115)
5-01268	CHI Scientific	4 x 5mg	Ask for price
HBV surface recombinant antigen HBsAg antigen
00123-V-01mg	Virogen	0,1 mg	267.5 EUR
HBV surface recombinant antigen HBsAg antigen
00123-V-1000ug	Virogen	1000 ug	1282.5 EUR
HBV surface recombinant antigen HBsAg antigen
00124-V-01mg	Virogen	0,1 mg	267.5 EUR
HBV surface recombinant antigen HBsAg antigen
00124-V-1000ug	Virogen	1000 ug	1282.5 EUR
Virus Hepatitis B Virus 320 Core Antigen (HBV 320 Core Ag) Protein
abx670003-50ug	Abbexa	50 ug	411 EUR
Recombinant Hepatitis B core antigen (HBcAg) protein (aa: 1-144, His Tag)
HBC15-R-10	Alpha Diagnostics	100 ug	347 EUR
Mouse Monoclonal Anti-Hepatitis B Virus core antigen (HBcAg) IgG
HBVC11-M	Alpha Diagnostics	100 ul	482 EUR
HBV Core Antigen (aa 1 - 149)(subtype ayr ) [His]
DAG2293	Creative Diagnostics	100 µg	724 EUR
HBV surface recombinant antigen HBsAg
00122-V-01mg	Virogen	0,1 mg	267.5 EUR
HBV surface recombinant antigen HBsAg
00122-V-1000ug	Virogen	1000 ug	1282.5 EUR
HbcAg - Hepatitis B Virus Core; Polyclonal
A00060	ScyTek Laboratories	6 ml	108 EUR
HbcAg - Hepatitis B Virus Core; Polyclonal
A00060.0025	ScyTek Laboratories	25 ml	252 EUR
HbcAg - Hepatitis B Virus Core; Polyclonal
A20060	ScyTek Laboratories	2 ml	79 EUR
HBV core protein (128-140)
5-01270	CHI Scientific	4 x 1mg	Ask for price
HBV core (107 115) Peptide
20-abx266079	Abbexa	411.00 EUR 662.00 EUR 314.00 EUR	10 mg 25 mg 5 mg
HCV core recombinant antigen
00115-V-01mg	Virogen	0,1 mg	267.5 EUR
HCV core recombinant antigen
00115-V-1000ug	Virogen	1000 ug	1282.5 EUR
HCV core recombinant antigen
00152-V-01mg	Virogen	0,1 mg	267.5 EUR
HCV core recombinant antigen
00152-V-1000ug	Virogen	1000 ug	1282.5 EUR
Recombinant HCV Core Antigen
VAng-Lsx04584-1mg	Creative Biolabs	1 mg	1686 EUR
Mouse Monoclonal anti-Hepatitis B core antigen (HBcAg) Clone#1 capture
HBC11-M	Alpha Diagnostics	100 ug	457 EUR
Mouse Monoclonal anti-Hepatitis B core antigen (HBcAg) Clone #2 detection
HBC12-M	Alpha Diagnostics	100 ug	457 EUR
Recombinant HBV Core Protein (aa 1-186) [His]
VAng-Lsx0176-inquire	Creative Biolabs	inquire	Ask for price
Recombinant (E.coli) Hepatitis B Virus core antigen (HBcAg) (1-144 aa, 17 kda, >95%)
HBVC11-R-100	Alpha Diagnostics	100 ug	286 EUR
Recombinant (E. coli) Hepatitis B Virus core antigen (HBcAg) (1-183aa, 18 kda, >95%)
HBVC15-R-25	Alpha Diagnostics	25 ug	225 EUR
Recombinant HBV Surface Antigen (Subtype ay)
VAng-Wyb8577-inquire	Creative Biolabs	inquire	Ask for price
HCV core recombinant antigen, Rhodamine
00115-V-R-01mg	Virogen	0,1 mg	267.5 EUR
HCV core recombinant antigen, Rhodamine
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HBV antigen HBsAg Antibody
abx140205-01mg	Abbexa	0.1 mg	328 EUR
HBV antigen HBsAg Antibody
abx140206-01mg	Abbexa	0.1 mg	328 EUR
Recombinant Hepatitis B HBV core Protein, Untagged, E.coli-100ug
QP12130-100ug	EnQuireBio	100ug	218 EUR
Recombinant Hepatitis B HBV core Protein, Untagged, E.coli-1mg
QP12130-1mg	EnQuireBio	1mg	1261 EUR
Recombinant Hepatitis B HBV core Protein, Untagged, E.coli-500ug
QP12130-500ug	EnQuireBio	500ug	663 EUR
Recombinant HBV e Antigen (aa 1-160)
VAng-0502Lsx-inquire	Creative Biolabs	inquire	Ask for price
Recombinant HBV Surface Antigen (Subtype adw) (Yeast)
VAng-Wyb8578-inquire	Creative Biolabs	inquire	Ask for price
Recombinant HBV Surface Antigen (Subtype adr) (Yeast)
VAng-Wyb8580-inquire	Creative Biolabs	inquire	Ask for price
Recombinant Feline Immunodeficiency Virus Core Antigen
DAG552	Creative Diagnostics	100ug	949 EUR
Hepatitis C virus core recombinant antigen
8802	Virostat	100 ug	398 EUR
Hepatitis B virus core recombinant antigen
8914	Virostat	100 ug	561.13 EUR
Hepatitis C virus core recombinant antigen
8924	Virostat	100 ug	343.63 EUR
Hepatitis B virus core recombinant antigen
8927	Virostat	100 ug	343.63 EUR
Hepatitis B virus core recombinant antigen
8929	Virostat	100 ug	398 EUR
Feline Immunodef. virus core recombinant antigen
8963	Virostat	100 ug	561.13 EUR
HCV core recombinant antigen, Biotin conjugate
00115-V-B-01mg	Virogen	0,1 mg	267.5 EUR
HCV core recombinant antigen, Biotin conjugate
00115-V-B-1000ug	Virogen	1000 ug	1282.5 EUR
HCV core recombinant antigen, FITC conjugate
00115-V-F-01mg	Virogen	0,1 mg	267.5 EUR
HCV core recombinant antigen, FITC conjugate
00115-V-F-1000ug	Virogen	1000 ug	1282.5 EUR
HCV core 2-119aa recombinant antigen
00150-V-01mg	Virogen	0,1 mg	267.5 EUR
HCV core 2-119aa recombinant antigen
00150-V-1000ug	Virogen	1000 ug	1282.5 EUR
HIV 1 p24 core recombinant antigen
00177-V-01mg	Virogen	0,1 mg	267.5 EUR
HIV 1 p24 core recombinant antigen
00177-V-1000ug	Virogen	1000 ug	1282.5 EUR
HTLV-I p24 core recombinant antigen
00204-V-01mg	Virogen	0,1 mg	267.5 EUR
HTLV-I p24 core recombinant antigen
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HBV Surface Antigen (Subtype ay)
VAng-0496Lsx-1mg	Creative Biolabs	1 mg	1594 EUR
Recombinant HBV Core Protein (aa 1-149) (Subtype ayr) [His]
VAng-Lsx0179-100g	Creative Biolabs	100 µg	594 EUR
Recombinant HBV Core Protein (aa 1-149) (Subtype ayr) [His]
VAng-Lsx0179-1mg	Creative Biolabs	1 mg	3069 EUR
Recombinant Hepatitis B HBV core delta Protein, Untagged, E.coli-100ug
QP12131-100ug	EnQuireBio	100ug	218 EUR
Recombinant Hepatitis B HBV core delta Protein, Untagged, E.coli-1mg
QP12131-1mg	EnQuireBio	1mg	1261 EUR
Recombinant Hepatitis B HBV core delta Protein, Untagged, E.coli-500ug
QP12131-500ug	EnQuireBio	500ug	663 EUR
Rabbit Anti-Hepatitis B core protein (anti-HBcAg) antiserum
HBC11-S	Alpha Diagnostics	100 ul	457 EUR
Recombinant HBV Surface Antigen (Subtype ad) (Saccharomyces cerevisiae)
VAng-0497Lsx-100g	Creative Biolabs	100 µg	1206 EUR
Recombinant HBV Surface Antigen (Subtype adr) (CHO Cells)
VAng-0498Lsx-500g	Creative Biolabs	500 µg	3349 EUR
Recombinant HBV Surface Antigen (Subtype ayw) (S Region)
VAng-0499Lsx-inquire	Creative Biolabs	inquire	Ask for price
Recombinant HBV e Antigen [GST] (1 mg/mL)
VAng-0503Lsx-inquire	Creative Biolabs	inquire	Ask for price