Un kit ELISA per sandwich alla leptina inutilizzabile per animali domestici

Viene segnalato un caso di errore del metodo di dosaggio ormonale. In questa rivista Chronobiology International, sono apparsi due articoli in cui un metodo ELISA per siero o plasma umano è stato utilizzato rispettivamente per siero di sangue di cavallo e di pecora. Dai nostri test, è risultato che tale metodo non funziona affatto per equini, pecore e altre specie animali.

L’uso di kit di test ormonali commerciali per specie eterologhe richiede sempre un’attenta procedura di validazione. In primo luogo, la stessa molecola ormonale di specie diverse non potrebbe condividere abbastanza omologia per essere riconosciuta e reagire con gli anticorpi utilizzati nel metodo. Inoltre, anche con una completa sovrapposizione delle molecole, devono essere considerate le possibili interferenze di altri componenti del campione (effetto matrice).

Technical viability of the YF MAC-HD ELISA kit for use in yellow fever-endemic regions

Valutazione del glutine nelle birre: confronto tra diversi kit ELISA commerciali e valutazione dell’analisi NIR come tecnica complementare

Tradizionalmente, le birre sono prodotte con cereali contenenti glutine. È fondamentale disporre di metodologie analitiche rapide che permettano il controllo del contenuto di glutine delle birre per i consumatori celiaci. Valutiamo il contenuto di glutine in 65 birre etichettate convenzionali e 41 senza glutine commercializzate in Europa e confrontiamo i risultati in un sottogruppo di 71 birre con tre kit ELISA. Questa ricerca consente di raccogliere informazioni sulla potenziale utilità complementare dell’analisi NIR applicata all’analisi del glutine delle birre senza glutine in termini di risparmio di tempo.

I risultati ottenuti con la tecnica ELISA hanno identificato la R5 competitiva come la più sensibile nel rilevare le prolamine, suscitando un numero maggiore di birre contenenti glutine superiore a 20 mg/kg. Il contenuto di glutine nelle birre convenzionali testate è aumentato con la presenza del frumento come materia prima e con l’utilizzo di lieviti tipo ale. Utilizzando la R5 competitiva, 3 delle 41 birre etichettate senza glutine sembravano contenere glutine sopra i 20 mg/kg e, al contrario, 15 su 65 delle birre convenzionali mostravano un contenuto di glutine inferiore a questa soglia. Secondo i nostri approcci, il NIR non ha ottenuto una correlazione adeguata con i risultati ELISA, né per la quantificazione del glutine né per la discriminazione, e quindi non può essere proposto come tecnica complementare.

Evaluation of Loopamp Leishmania Detection Kit and Leishmania Antigen ELISA for Post-Elimination Detection and Management of Visceral Leishmaniasis in Bangladesh

With reduced prevalence of visceral leishmaniasis (VL) in the Indian subcontinent (ISC), direct and field deployable diagnostic tests are needed to implement an effective diagnostic and surveillance algorithm for post-elimination VL control. In this regard, here we investigated the diagnostic efficacies of a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay (Loopamp™ Leishmania Detection Kit, Eiken Chemical CO., Ltd, Japan), a real-time quantitative PCR assay (qPCR) and the Leishmania antigen ELISA (CLIN-TECH, UK) with different sampling techniques and evaluated their prospect to incorporate into post-elimination VL control strategies.

Eighty clinically and rK39 rapid diagnostic test confirmed VL cases and 80 endemic healthy controls were enrolled in the study. Peripheral blood and dried blood spots (DBS) were collected from all the participants at the time of diagnosis. DNA was extracted from whole blood (WB) and DBS via silica columns (QIAGEN) and boil & spin (B&S) methods and tested with qPCR and Loopamp. Urine was collected from all participants at the time of diagnosis and was directly subjected to the Leishmania antigen ELISA.

41 patients were followed up and urine samples were collected at day 30 and day 180 after treatment and ELISA was performed. The sensitivities of the Loopamp-WB(B&S) and Loopamp-WB(QIA) were 96.2% (95% CI 89·43-99·22) and 95% (95% CI 87·69-98·62) respectively. The sensitivity of Loopamp-DBS(QIA) was 85% (95% CI 75·26- 92·00). The sensitivities of the qPCR-WB(QIA) and qPCR-DBS(QIA) were 93.8% (95% CI 86·01-97·94) and 72.5% (95% CI 61·38-81·90) respectively.

The specificity of all molecular assays was 100%. The sensitivity and specificity of the Leishmania antigen ELISA were 97.5% (95% CI 91·47-99·70) and 91.95% (95% CI 84·12-96·70) respectively. The Leishmania antigen ELISA depicted clinical cure at day 180 in all the followed-up cases. Efficacy and sustainability identify the Loopamp-WB(B&S) and the Leishmania antigen ELISA as promising and minimally invasive VL diagnostic tools to support VL diagnostic and surveillance activities respectively in the post-elimination era.

Determinazione dell’aflatossina M1 nel latte crudo utilizzando un metodo HPLC-FL in confronto con l’applicazione di kit ELISA commerciali in campioni di latte crudo provenienti da varie regioni della Grecia

L’aflatossina M1 altamente tossica (AFM1) viene spesso rilevata nel latte utilizzando un saggio immunoenzimatico (ELISA) a scopo di screening, mentre la cromatografia liquida ad alte prestazioni con rivelatore a fluorescenza (HPLC-FL) è il metodo di riferimento utilizzato per la conferma .. Lo scopo del presente studio era il confronto tra tre kit ELISA disponibili in commercio e un metodo HPLC-FL di nuova concezione per la determinazione dell’AFM1 nei campioni di latte. Il metodo HPLC-FL sviluppato è stato convalidato per AFM1 e Aflatossina M2 (AFM2), determinando l’accuratezza, la precisione, la linearità, il limite di decisione e la capacità di rilevamento con risultati abbastanza buoni.

Anche tutti e tre i kit ELISA sono stati convalidati e hanno mostrato prestazioni altrettanto buone con tassi di recupero elevati. Inoltre, i valori del limite di rilevamento (LOD) e del limite di quantificazione (LOQ) sono risultati significativamente inferiori al limite massimo di residui (MRL) (50 ng kg ^-1 ). Dopo la valutazione di tutti e tre i kit commerciali, è stato utilizzato il kit ELISA con le prestazioni ottimali insieme al metodo HPLC per la determinazione di AFM1 in campioni di latte crudo vaccino, caprino e ovino (396) ottenuti da produttori in diverse regioni della Grecia. La valutazione di entrambi i metodi ha mostrato che questo kit ELISA può essere considerato un metodo alternativo più veloce e altrettanto affidabile all’HPLC nell’analisi di routine per la determinazione di AFM1 nel latte.